特级毛片a片久久久久久,出轨熟女人妻hd中文,国产免费观看久久黄av片,在线观看国产精品

技術文章 / article 您的位置:網(wǎng)站首頁 > 技術文章 > 限制性內(nèi)切酶的一般原則和建議

產(chǎn)品列表

PROUCTS LIST

限制性內(nèi)切酶的一般原則和建議

發(fā)布時間: 2022-06-24  點擊次數(shù): 1669次
  限制性內(nèi)切酶的一般原則和建議
  DNA中加上酶,然后保溫一段時間就可以了。但是在實際操作過程中,我們不斷聽到:切不動,裝不上。問題在什么地方?能系列生產(chǎn)限制性內(nèi)切酶的公司國際上,就那么幾個,位列前3的是NEB,Fermentas,SibEnzyme。這些公司提供酶的品質一般都能得到保證。您可以懷疑酶的質量問題,但是更多的問題來源于模板是否合適酶切要求。下面幾點對你的酶切是有幫助的。
  1)成功酶切的關鍵是準備好模板DNA。DNA樣品中不能含有有機溶劑(會使酶變性或產(chǎn)生星號貨性),不能含有干擾酶活性的污染物質,不能含有高濃度的EDTA(TE中的EDTA濃度較低,對Mg的濃度影響較小);同時要對DNA甲基化程度及其對酶切效率的影響要做到心中有數(shù)。
  2)選用合適的酶。根據(jù)酶切序列選用,特別注意選用甲基化對酶活性的干擾。
  3)正確使用和保存酶。酶需要保存在-20度的低溫環(huán)境中,只是在需要用酶才從冰箱中取出來。運輸和臨時存放時需要將酶至于冰上。手拿酶管時不要接觸酶管下步含酶的部分,移酶時盡可能用長TIP,避免污染。用完后需要及時送回原處。注意:酶通常是最后加。
  4)反應體積需要根據(jù)實驗目的定,常規(guī)的酶切一般要維持在10-50ul,酶切鑒定10-20ul就可以了。
  5)模板濃度問題:濃度過高,溶液黏度過大,酶不能有效擴散,酶切效果不會好。濃度過低,也會影響酶活性。
  6)注意模板用量和反應體積的關系。對酶用量,模板用量,反應體積等要素的確定需要的是時間和經(jīng)驗的積累。
  7)酶切反應的各個組分加完后,需要用TIP小心混勻幾次,shortspin一下就可以保溫了。一般不能使用振蕩器混勻。
  8)反應溫度的選擇。一般反應都用37度,但是SmaI的適合溫度是25度,37度時酶仍表現(xiàn)出活性,但是效率下降50%。部分從耐熱菌制備的酶需要在37度以上的溫度反應,如TaqI的最適溫度為65度,37度保溫,效率僅為前者的1/10。
  9)反應時間的選擇。一般酶切鑒定30分鐘就可以了。要*酶切可以采用少量的酶長時間反應,或較高的酶量短時間處理都可以達到。在使用高酶量的時候需要注意甘油的最終濃度不要超過5%,也就是說10ul的體系,酶的用量不要超過1ul。
  10)是否和如何終止反應?酶切鑒定之類的實驗不需要特殊處理。滅活的手段:加入高濃度的EDTA;65度或80度熱處理20-30分鐘;部分從高溫菌純化出來的內(nèi)切酶由于最適的反應溫度比較高,熱處理滅活不一定*,需要用苯酚/氯仿/乙醇方法純化;電泳回收也是實驗室常用除酶的手段。
在線客服 聯(lián)系方式

服務熱線

17317196276

国产xxxx做受视频国语对白l| 婷婷综合久久中文字幕蜜桃三电影| 亚洲精品一区二区另类图片| 精品久久久无码中文字幕| 天干天干天啪啪夜爽爽av| 精品无码三级在线观看视频| 嫩bbb槡bbbb槡bbbb| 狠狠色噜噜狠狠狠888米奇视频| 国产精品视频一区二区三区不卡| 人妻少妇啊灬啊灬用力啊快| 大肉蒂被嘬的好爽h公主| 国产精品一区二区毛卡片| 色一情一乱一伦一区二区三区| 人妻互换一二三区激情视频| 欧美大屁股xxxx| 最美情侣高清免费视频观看下载| 狂野欧美性猛交xxxx| 娇妻玩4p被三个男人伺候电影| 暴躁老外玩minecraft| 亚洲熟妇无码一区二区三区| 97偷自拍亚洲综合图片| 国产av精品一区二区三区久久| 亚洲av欧洲av人人爽爽软件| 羞羞答答麻豆国产免费观看| 邻居一晚让我高潮3次正常吗 | 日本三级在线播放| 天天爽夜夜爽夜夜爽| 金鸽源赛鸽公棚春棚| 无码人妻一区二区三区| 国产精品久久高潮呻吟无码| 老师说我考好了就随便我怎样| 老头在厨房添下面很舒服| 日韩精品无码视频一区二区蜜桃| 风流少妇a片一区二区蜜桃| 国产精品99亚发布| 日韩+国产| 国产女人的高潮国语对白入口| 国产精品久久久久久久| 久久久久久久人妻无码中文字幕爆| 少妇多水xxxx色情免费| 国产精品久久久久久|